Penentuan waktu panen rambai harus dilakukan secara teliti karena buah rambai tidak mengalami pematangan yang sempurna jika dipetik terlalu muda. Ciri utama buah matang adalah perubahan warna kulit dari hijau muda menjadi kekuningan atau cokelat terang, tekstur daging buah melunak saat ditekan perlahan, serta rasa manis keasaman yang seimbang.
Teknik pemanenan rambai wajib memperhatikan sifat pembungaan tanaman yang muncul pada batang atau cabang tua. Pemanenan dilakukan dengan memotong tangkai utama tandan buah menggunakan gunting pangkas tajam, sekitar 2 sampai 3 sentimeter dari pangkal tandan. Hindari memetik buah secara langsung satu per satu dengan menariknya karena dapat merusak mata tunas bunga untuk musim tanam berikutnya.
Setelah dipetik, tangani panen rambai dengan hati-hati karena kulitnya tipis dan mudah memar jika tertumpuk lebih dari 3 lapis dalam keranjang. Lakukan pemanenan pada pagi hari antara pukul 07.00 hingga 10.00 WIB saat suhu udara masih sejuk untuk menekan tingkat respirasi buah, sehingga kesegaran buah dapat bertahan hingga 3 sampai 5 hari di suhu ruang.